液相色譜儀在使用時需要注意以下諸多事項：

一、儀器操作前的準備工作

環(huán)境要求

液相色譜儀應放置在一個清潔、干燥、通風良好的實驗室環(huán)境中。理想的溫度范圍一般為 20 - 25℃，相對濕度在 40% - 60%。溫度和濕度的劇烈變化可能會影響儀器的性能和穩(wěn)定性。例如，高溫可能會導致流動相揮發(fā)，影響流動相組成，進而影響分離效果；高濕度可能會引起儀器部件生銹或短路。

儀器應放置在平穩(wěn)的實驗臺上，避免震動。因為液相色譜儀是一種高精度的儀器，即使輕微的震動也可能會影響泵的流速精度和檢測器的信號穩(wěn)定性，導致色譜峰變形或基線漂移。

流動相的準備

流動相的純度至關重要。使用前，應確保所選用的溶劑（如甲醇、乙腈、水等）為色譜純級別。如果溶劑純度不夠，其中的雜質可能會在色譜圖中產生額外的峰，干擾目標化合物的檢測。例如，含有雜質的水作為流動相可能會導致基線噪聲增大。

流動相在使用前需要進行過濾和脫氣處理。過濾可以去除其中的微小顆粒，防止這些顆粒堵塞色譜柱或損壞儀器的泵系統(tǒng)。一般使用 0.45μm 或 0.22μm 的濾膜進行過濾。脫氣是為了除去溶解在流動相中的氣體，因為氣體在泵中可能會形成氣泡，導致泵的流速不穩(wěn)定，在檢測器中也可能會產生噪聲。常見的脫氣方法有超聲脫氣、氦氣脫氣等。

色譜柱的安裝與維護

在安裝色譜柱時，要確保色譜柱的方向正確。大多數色譜柱都有標記，標明流動相的入口和出口方向。如果安裝方向錯誤，可能會導致柱效下降，分離效果變差。

新色譜柱在使用前需要進行適當的平衡。平衡的目的是使色譜柱內的固定相充分被流動相浸潤，以達到穩(wěn)定的分離性能。平衡時間因色譜柱的類型和尺寸而異，一般需要用流動相沖洗色譜柱 30 分鐘到數小時不等。

二、儀器操作過程中的注意要點

泵的操作

啟動泵時，應先以較低的流速（如 0.1 - 0.2 mL/min）啟動，然后逐漸增加到所需的流速。這樣可以避免瞬間高壓對色譜系統(tǒng)造成損壞。在操作過程中，要密切關注泵的壓力顯示。正常情況下，泵壓力應該在儀器規(guī)定的壓力范圍內。如果壓力過高，可能是色譜柱堵塞或者管路中有阻塞物；如果壓力過低，可能是有泄漏或者泵出現故障。

不要讓泵空轉。當流動相瓶中的液體快用完時，要及時更換，否則泵在沒有液體的情況下運轉會損壞泵頭的密封件。

進樣操作

進樣時要確保進樣針的清潔。使用前后，應該用適當的溶劑清洗進樣針，以防止樣品殘留和交叉污染。對于手動進樣，進樣的速度要適中。進樣速度過快可能會導致壓力波動，使色譜峰變形；進樣速度過慢可能會使樣品擴散，影響分離效果。

進樣體積也要控制在合理范圍內。進樣體積過大可能會導致色譜峰過載，出現平頭峰，影響定量分析的準確性；進樣體積過小則可能會導致檢測信號過弱，難以準確檢測。

檢測器的使用

不同的檢測器（如紫外檢測器、熒光檢測器、蒸發(fā)光散射檢測器等）有不同的操作要求。對于紫外檢測器，要確保檢測波長的準確性。在檢測前，需要對波長進行校準，因為波長的偏差可能會導致檢測靈敏度下降或者檢測不到目標化合物。

要注意檢測器的響應時間設置。響應時間過短可能會使基線噪聲增大；響應時間過長可能會使色譜峰變寬，影響峰形和分離度。

三、儀器使用后的維護與保養(yǎng)

清洗系統(tǒng)

實驗結束后，要用適當的溶劑清洗整個液相色譜系統(tǒng)。一般先使用不含樣品的流動相沖洗系統(tǒng)，以去除殘留的樣品和雜質。然后可以使用一種強溶劑（如純甲醇或乙腈）對系統(tǒng)進行沖洗，以確保系統(tǒng)內沒有殘留的物質。對于含有緩沖鹽的流動相，一定要先用不含緩沖鹽的流動相沖洗，再用有機溶劑沖洗，因為緩沖鹽在有機溶劑中可能會結晶，堵塞系統(tǒng)。

色譜柱的保存

色譜柱在使用后應妥善保存。如果長時間不使用，應將色譜柱從儀器中取出，用合適的溶劑（如甲醇或乙腈）沖洗后，兩端用堵頭封住，防止固定相干涸和空氣中的雜質進入。對于反相色譜柱，一般可以保存在純甲醇或乙腈中；對于正相色譜柱，可能需要保存在正己烷等非極性溶劑中。

儀器的關機順序

正確的關機順序很重要。一般先關閉檢測器，然后停止泵的運行，最后關閉儀器的電源。這樣可以避免突然斷電等情況對儀器造成損壞，并且有助于延長儀器的使用壽命。